微囊藻毒素分析試劑盒說明書

微囊藻毒素分析試劑盒說明書

（時(shí)間分辨熒光免疫法）

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：微囊藻毒素分析試劑盒（時(shí)間分辨熒光免疫法）

【包裝規(guī)格】

96測(cè)試/盒

【預(yù)期用途】

本試劑盒適用于水中、藻樣或水產(chǎn)品中微囊藻毒素的定量檢測(cè)。

  1. 水樣的處理：將采集的水樣離心取上清或過濾后的濾水直接測(cè)定。
  2. 藻樣的處理：采集的藻樣可以三種方法處理：a. 反復(fù)凍融（3-5次）；b. 超聲破碎；c. 細(xì)胞壓榨機(jī)破碎。
  3. 水產(chǎn)品的處理：方法較復(fù)雜，可參考文獻(xiàn)方法：Valéria Freitas de Magalh?es, Raquel Moraes Soares, Sandra M.F.O. Azevedo. Toxicon, 2001, 39:1077

【檢驗(yàn)原理】

時(shí)間分辨熒光免疫分析（Time-resolved fluorescence immunoassay，TRFIA）是目前標(biāo)記免疫學(xué)技術(shù)中靈敏度和穩(wěn)定性較高的新一代免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)。其利用具有獨(dú)特?zé)晒馓匦缘蔫|系元素及其螯合物為示蹤物,代替酶、同位素、化學(xué)發(fā)光物質(zhì)等來標(biāo)記抗體或抗原，待抗原或抗體反應(yīng)發(fā)生后，用時(shí)間分辨熒光免疫分析檢測(cè)儀測(cè)定反應(yīng)產(chǎn)物中的熒光強(qiáng)度。本TRFIA試劑盒的技術(shù)原理是樣品中的微囊藻毒素與微囊藻毒素-BSA銪標(biāo)記物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗微囊藻毒素單克隆抗體。檢測(cè)過程中，先加入單抗到測(cè)試孔中，測(cè)試孔中已包被有羊抗鼠lgG，用于捕獲加入的鼠抗微囊藻毒素單抗，接著加入含有微囊藻毒素的樣品及微囊藻毒素-BSA銪標(biāo)記物，銪標(biāo)記物與樣品中的微囊藻毒素競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合同樣的抗體結(jié)合點(diǎn)。孵育后洗掉小孔中所有沒有結(jié)合的分子，加入增強(qiáng)液，銪在增強(qiáng)液作用下從復(fù)合物上解離后發(fā)出強(qiáng)的熒光。

由于各個(gè)孔中抗體可結(jié)合位點(diǎn)是相同的，并且加入的微囊藻毒素銪標(biāo)記物的量也是相同的，樣品中微囊藻毒素含量低的則銪標(biāo)記物結(jié)合得多，檢測(cè)熒光值高。反之，樣品中微囊藻毒素含量高的則銪標(biāo)記物結(jié)合得少，檢測(cè)熒光值低。熒光值與微囊藻毒素的含量成反比。本試劑盒的檢測(cè)示意圖如下：

【主要組成成份】

組份名稱規(guī)格數(shù)量主要成分
MCLR標(biāo)準(zhǔn)品0.5 mL/瓶6A 0ng/mlL   B 0.1ng/mL         C 0.3ng/mL  D 1.0ng/mL      E 2.0ng/mL  F 4.0ng/mL 
MCLR銪標(biāo)記物0.5 mL/瓶1Eu-BSA-MCLR，BSA、Tris-HCl，防腐劑
MCLR反應(yīng)板96孔/塊1鼠二抗，微孔板
MCLR分析緩沖液30 mL/瓶1Tris-HCl、NaCl，BSA等
MCLR單抗6 mL/瓶1MCLR單抗、NaCl，BSA等
增強(qiáng)液50 mL/瓶1β-NTA、TOPO等
濃縮洗液25×40 mL/瓶1Tris-HCl、NaCl、Tween-20等
封片張3/
說明書份1/
純化水10.0 mL/瓶1/

【自備的設(shè)備和試劑】

時(shí)間分辨熒光免疫分析儀；

100 mL量筒或其他適用容器；

振蕩器；

洗板機(jī)；

不同量程的移液器；

蒸餾水或去離子水；

其他適用企業(yè)校準(zhǔn)品。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

  1. 本試劑盒于2~8℃儲(chǔ)存，有效期12個(gè)月。開封后，儲(chǔ)存于2~8℃，試劑盒有效期為4周。
  2. 請(qǐng)將不用的微孔板放進(jìn)原錫箔袋中，并且與提供的干燥劑一起重新密封。
  3. 試劑盒生產(chǎn)日期和失效日期見產(chǎn)品標(biāo)簽。

【適用儀器】

1. 廣州市達(dá)瑞生物技術(shù)股份有限公司DR6606或DR6626時(shí)間分辨熒光免疫分析儀。

2. 可適用鑭系時(shí)間分辨熒光免疫分析檢測(cè)的其他儀器。

【檢驗(yàn)方法】

  1. 試劑的準(zhǔn)備

（1）洗滌液：將40 mL濃縮洗液和1000 mL純化水混合（1:25倍稀釋），作為工作洗滌液。

（2）MCLR銪標(biāo)記物：用分析緩沖液以1:20倍稀釋作為銪標(biāo)記物工作液，一次配制一次試驗(yàn)所需用量。

  • 將所需數(shù)量的包被反應(yīng)條置室溫平衡。
  • 每孔50 μL?MCLR標(biāo)準(zhǔn)品或樣品，50 μL?MCLR銪標(biāo)物，50 μL?MCLR單抗，按順序加入微孔反應(yīng)條小孔中，并加貼封片，室溫振動(dòng)孵育45分鐘。
  • 用洗滌液沖洗6次，拍干。
  • 每孔加入增強(qiáng)液150?μL，室溫振蕩孵育5分鐘。
  • 測(cè)定熒光值，激發(fā)光為340nm，發(fā)射光為615nm。

【計(jì)算方法】

可采用以下兩種方法進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，計(jì)算樣品中的微囊藻毒素濃度：

1、半對(duì)數(shù)擬合法

測(cè)值之后計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品平均熒光值，A點(diǎn)即0ng/ml的熒光值為Bmax，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)品B至F點(diǎn)（0.1，0.3，1.0，2.0和4.0ng/mL）的結(jié)合率B（B標(biāo)準(zhǔn)品/Bmax），以B（B標(biāo)準(zhǔn)品/Bmax）作為Y軸，微囊藻毒素標(biāo)準(zhǔn)濃度的對(duì)數(shù)值為X軸（InMC），繪制曲線，獲得線性擬合方程。通過每個(gè)樣品的結(jié)合率（B樣品/Bmax），根據(jù)擬合方程計(jì)算出樣品中的微囊藻毒素濃度。

2、logit-log擬合法

Logit-log是免疫學(xué)檢測(cè)中的用于競(jìng)爭(zhēng)法的經(jīng)典模型。與半對(duì)數(shù)擬合法類似，測(cè)值之后計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品平均熒光值，A點(diǎn)即0ng/ml的熒光值為Bmax，并計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)品B至F點(diǎn)（0.1，0.3，1.0，2.0和4.0ng/mL）的結(jié)合率B（B標(biāo)準(zhǔn)品/Bmax），縱坐標(biāo)為，微囊藻毒素標(biāo)準(zhǔn)濃度的對(duì)數(shù)值為X軸（InMC）, 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,獲得線性擬合方程。通過每個(gè)樣品的結(jié)合率B（B樣品/Bmax），根據(jù)擬合方程計(jì)算出樣品中的微囊藻毒素濃度。

在用上述兩種方法計(jì)算樣品中的微囊藻毒素濃度時(shí)，如果樣品結(jié)合率B（B標(biāo)準(zhǔn)品/Bmax）在設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合率范圍之內(nèi)，就可以得出一個(gè)具體的濃度值。如果樣品結(jié)合率超出了范圍則說明樣品的濃度大于高濃度的標(biāo)準(zhǔn)（本試劑盒中為4ng/ml）或低于低濃度的標(biāo)準(zhǔn)（本試劑盒中為0.1ng/ml），高濃度樣品需稀釋后重測(cè)，低濃度樣品則需富集后重測(cè)。

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

  1. 劑量反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性相關(guān)系數(shù)r2值應(yīng) ≥?0.99；
  2. 精密性：本試劑盒檢測(cè)的變異系數(shù)（CV）應(yīng) ≤?15.0%。

【注意事項(xiàng)】

1. 請(qǐng)嚴(yán)格按照說明書操作。

2. 不同批號(hào)的試劑盒不要混用；本試劑盒各組分只能一次性使用，不能重復(fù)使用。

3. 整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程應(yīng)盡量在干凈無塵的環(huán)境下進(jìn)行。

4. 本試劑盒與待檢樣本使用前必須平衡至室溫。

5. 為了避免樣本中任何潛在的生物危險(xiǎn)，檢測(cè)樣本應(yīng)視為具有傳染性物質(zhì)，避免接觸到皮膚和粘膜。

6. 洗板機(jī)在每天使用時(shí)應(yīng)進(jìn)行校正注液量和殘留量，注意管道是否通暢。洗滌時(shí)，確認(rèn)每孔中的洗滌液都注滿微孔。每次洗滌后都需在無塵吸水紙上拍干微孔中的液滴。

7. 使用干凈的一次性容器配制銪標(biāo)記物，應(yīng)避免銪標(biāo)記稀釋液進(jìn)入銪標(biāo)記物原液中。

8. 加增強(qiáng)液時(shí)，吸頭應(yīng)懸空，避免因吸頭碰到小孔邊緣或其中試劑而造成增強(qiáng)液污染。

9. 本試劑盒中所有試劑應(yīng)置于2~8℃冰箱保存，自生產(chǎn)日期起有效期為一年。開啟后請(qǐng)盡量避免反復(fù)使用，板條若未能一次用完，剩余板條用塑料袋封口后密封保存。

Posted by 光語小編 Category: 資訊中心 0 Comment

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